Objective: Commercial available NAT systems are usually not validated for screening of post-mortem blood samples. NAT testing might be challenging due to inhibitory substances in the cadaveric blood sample that cause false-negative test results. Validation studies have to be performed to show the performance characteristics of the NAT assays for testing cadaveric blood.
Methods: A set of 32 post-mortem serum and plasma samples from cornea donors and 40 control samples from blood donors, serologically and NAT negative for all investigated parameters, were spiked with defined concentrations of WHO reference material and tested for HIV-1, HCV, HBV, and HAV by NAT using DRK Baden-Württemberg-Hesse CE PCR kits. Analytical sensitivity, analytical specificity and reproducibility/precision were validated and compared with each other in both groups of samples.
Results: The analytical sensitivity was 100% for control and post-mortem specimens when spiked with virus standards at concentrations of 3 × level of detection (LOD). Invalid results did not occur. The analytical specificity rate for all assays was 100%. Intra-assay variation was analyzed as a function of sample material and sampling time post mortem. Values of % coefficient of variation (%CV) were comparable for serum and plasma but slightly higher for post-mortem samples especially for those samples collected more than 24 h post mortem.
Conclusion: Based on the presented validation, postmortem donor samples can be tested with the automated DRK Baden-Würtemberg-Hesse NAT system.
Hintergrund: Kommerzielle NAT Assays sind üblicherweise nicht für das Screening von Post-mortem-Blut validiert. Die Durchführung der NAT-Testung ist aufgrund inhibitorischer Substanzen im Blut Verstorbener schwierig und kann zu falsch-negativen Testergebnissen führen. Um die Leistungsmerkmale der NAT-Assays für die Testung von Post-mortem-Blut zu bestimmen, müssen Validierungsuntersuchungen durchgeführt werden.
Methoden: Plasma-und Serumproben von insgesamt 32 Hornhautspendern (Cornea) und 40 Kontrollproben von Blutspendern wurden serologisch und mittels NAT negativ auf HIV-1, HCV, HBV und HAV getestet. Aliquots dieser Proben wurden mit definierten Konzentrationen von WHO-NAT-Standardpräparationen gespickt und die Leistungsmerkmale der Assays wie Sensitivität, Spezifität und Reproduzierbarkeit bzw. Präzision validiert.
Ergebnisse: Die analytische Sensitivität betrug 100% sowohl für die Kontrollproben als auch für die Post-mortem-Proben. Alle Proben, die mit einer Viruskonzentration des dreifachen der Nachweisgrenze gespickt worden waren, wurden NAT-positiv detektiert. Die analytische Spezifität der NAT-Assays lag bei jeweils 100%. Es kam zu keinen invaliden Testergebnissen. Die Intra-Assay-Präzision war bei Testung der Kontrollproben am höchsten. Ein höherer % Variationskoeffizient (%CV) wurde für Post-mortem-Proben im Vergleich zu den Kontrollproben ermittelt und zeigte sich insbesondere bei Proben, die später als 24 h post mortem entnommen wurden.
Schlussfolgerung: Die validierten DRK-Baden-Würtemberg-Hessen-PCR-Assays sind für das automatisierte Screening von Post-mortem-Spenderproben geeignet.
Keywords: HAV; HBV; HCV; HIV; NAT; Post-mortem blood; Tissue donation; Validation.